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转染试剂线性PEI溶液的配制(1mg/ml)
聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)是聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳个原子,即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。PEI,可用作转染试剂,它可以缩聚DNA分子形成颗粒并转染真核细胞。有实验证明,分子量为25000的线性PEI即Polysciences 23966转染效率zui高。
下面将主要介绍polysciences 线性PEI(#23966)的产品特性及其溶液的配制过程。
1. 产品特性:
产品名称:线性聚乙烯亚胺(PEI)
CAS号 | 9002-98-6,26913-06-4 | 分子式 | (CHCHNH)n | 分子量 | 25000 |
熔点 | 73-75°C | 外观 | 白色或黄色固体 | 结构式 | |
溶解性 | 溶于热水,低pH值的冷水,甲醇和乙醇;不溶于:苯,aether和丙酮 | 储存 | 室温 |
2. 溶液配制
此指导说明书是经polysciences公司研究,测试及其客户反馈的后编写的。下面推荐一种简单适用而的方法,讲述如何配制浓度为1mg/mL的转染试剂的配制。
材料:
1g #23966、1L 纯水(Milli-Q®纯水,注射用水(WFI),或类似的生物级水)、12 M盐酸、10 M氢氧化钠、一次性0.1-0.2µm PES真空无菌过滤器、无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶。
器材:
1 L 玻璃烧杯、1 L玻璃量筒、核准pH计、2支1 mL塑料移液管、托盘、聚四氟乙烯(PTFE)搅拌棒、真空泵
配制过程:
1g #23966——900mL水溶解——搅拌、加热(60-80°C)——加HCl调pH到2.0左右——盖上烧杯,搅拌3h(直至粉末完全溶解)——冷却至室温——加NaOH调pH到6.9-7.1——移液到量筒,加水补足至1L——真空过滤消毒——分装,-20°C保存。
备注:加热或加酸都有助于PEI溶解。当然酸可能不用加那么多,详细用量可试加一点搅拌看看,足够溶解就行,不一定需要加到pH那么低。
试剂储存:
冷冻部分溶液可在-20°C保存长达一年;部分解冻的溶液可在4°C保存2周,不可反复冻融。
粉末储存:
未开封的粉末有效期两年。可在室温下保存直至使用。